TL1A/DR3細(xì)胞篩選模型
發(fā)布時(shí)間:2024/07/26分類:技術(shù)文章來(lái)源:科佰生物
背景
TL1A，亦稱為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)抑制因子（VEGI）和腫瘤壞死因子超家族成員15（TNFSF15），是人類第9號(hào)染色體的TNFSF15基因編碼的II型跨膜蛋白。TL1A與TNF家族的其他成員類似，形成由β夾心組成的穩(wěn)定非共價(jià)同源三聚體結(jié)構(gòu)。TL1A最初以膜結(jié)合形式（mTL1A）存在，隨后在金屬蛋白酶切割作用下，以可溶性蛋白（sTL1A）釋放行使功能。TL1A在多種免疫細(xì)胞中均有表達(dá)，如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、T細(xì)胞等。最近的研究表明，TL1A在自身免疫性疾病中異常表達(dá)包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病（inflammatory bowel disease, IBD）、牛皮癬、原發(fā)性膽汁性肝硬化、系統(tǒng)性狼瘡紅斑和強(qiáng)直性脊柱炎。
DR3，亦稱為TNFRSF25，是腫瘤壞死因子受體超家族的一種細(xì)胞因子受體，由TNFRSF25基因編碼。在TNFRSF的所有成員中DR3與TNFR1具有最高的同源性。DR3是一種I型跨膜蛋白，也是一種有效的共刺激分子，類似于OX40, 4-1BB和GITR，主要在活化的和抗原刺激的T細(xì)胞上表達(dá)。DR3蛋白包含四個(gè)半胱氨酸殘基、兩個(gè)潛在的N連接糖基化位點(diǎn)、一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)帶有死亡結(jié)構(gòu)域 (DD)的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。DR3是TL1A在淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的唯一受體。
TL1A/DR3信號(hào)通路
在靜息的T細(xì)胞中，DR3以可溶性形式表達(dá)，保護(hù)細(xì)胞免于凋亡。活化的T細(xì)胞表達(dá)跨膜DR3。sTL1A結(jié)合DR3 （膜結(jié)合形式）激活下游信號(hào)級(jí)聯(lián)，從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和炎癥。sTL1A/DR3相互作用可觸發(fā)兩種不同的信號(hào)通路，分別引起炎癥和細(xì)胞凋亡。首先，DR3的死亡結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞質(zhì)中的適配蛋白TNFR相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(TRADD)結(jié)合，然后招募TNFR相關(guān)因子2 (TRAF2)和受體相互作用蛋白1 (RIP1)。這些復(fù)合物激活MAPKs (ERK、p38和JNK)、NF-κB和效應(yīng)激酶PI3K信號(hào)傳導(dǎo)。最后，激活的信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)促炎基因的表達(dá)，參與免疫相關(guān)疾病的發(fā)生。TRADD結(jié)合FAS相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域(FADD)和RIP3，激活半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-8 (caspase-8)形成復(fù)合物，進(jìn)一步激活下游caspase通路(如caspase-3和-7)，誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞死亡。當(dāng)caspase-8活性被阻斷時(shí)，F(xiàn)ADD、RIP3、RIP1與下游效應(yīng)分子混合譜系激酶結(jié)構(gòu)域樣蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein, MLKL)在磷酸化后形成胞質(zhì)“壞死體”復(fù)合體。然后，MLKL寡聚到細(xì)胞膜上，導(dǎo)致壞死性細(xì)胞死亡，這是一種伴有強(qiáng)烈炎癥的細(xì)胞死亡形式。在這個(gè)過(guò)程中，NF-κB被證明可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制蛋白(c-IAP)的激活，從而介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的負(fù)反饋調(diào)節(jié)和抑制。事實(shí)上，更多的證據(jù)表明，sTL1A與DR3的連接優(yōu)先誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的促炎途徑而不是凋亡。
TL1A/DR3信號(hào)的下游作用包括產(chǎn)生幾種關(guān)鍵的因子，如IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-17，以及IL-2、IL-4、IL-13，這些促炎因子表達(dá)上調(diào)，并可能產(chǎn)生致病作用。
也有文章揭露，在體內(nèi)通過(guò)可溶性TL1A觸發(fā)DR3可促進(jìn)抗原特異性CD8(+) T細(xì)胞的增殖和積累，以及它們向CTL的分化。此外，DR3也作為記憶性CD8(+) T細(xì)胞的共刺激受體，其被觸發(fā)時(shí)會(huì)增強(qiáng)內(nèi)源性抗原特異性記憶CD8(+) T細(xì)胞的二次擴(kuò)增。因此，DR3（TNFRSF25）激動(dòng)劑，可能潛在地用于增強(qiáng)旨在誘導(dǎo)人類抗腫瘤CD8(+) T細(xì)胞的免疫原性從而達(dá)到抗腫瘤的作用。目前處于臨床I期的抗體藥物PTX-35，就是一種用于T細(xì)胞擴(kuò)增的新型TNFRSF25激動(dòng)劑。PTX-35協(xié)同腫瘤抗原負(fù)載gp96共刺激CD8+ T細(xì)胞激活DC，增強(qiáng)先天性免疫和繼發(fā)性免疫，從而產(chǎn)生有效的腫瘤殺傷效應(yīng)細(xì)胞和長(zhǎng)期記憶。
TL1A/DR3藥物研發(fā)進(jìn)展
2023年10月23日，羅氏宣布收購(gòu)Telavant，獲得其在研核心產(chǎn)品TL1A抗體RVT-3101，因此越來(lái)越多的藥企布局TL1A/DR3藥物的研發(fā)。目前關(guān)于TL1A靶點(diǎn)，在研藥物有單抗也有雙抗，主要針對(duì)克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎等IBD疾病。關(guān)于DR3靶點(diǎn)，目前就只有PTX-35在研。
TL1A/DR3細(xì)胞篩選模型
為助力TL1A/DR3靶點(diǎn)藥物研發(fā)，科佰生物分別開(kāi)發(fā)了TL1A/DR3報(bào)告基因細(xì)胞篩選模型。部分細(xì)胞產(chǎn)品驗(yàn)證結(jié)果如下：
DR3 Effector Reporter Cell CBP74236
Figure 4. Dose Response of Recombinant Human TL1A in DR3 Effector Reporter Cells (C15).
Figure 5. Inhibition of Recombinant Human TL1A-induced Reporter Activity by hTL1A Neutralization Abs in DR3 Effector Reporter Cells(C15).
Figure 6. Blocking of TL1A induced DR3 Effector Reporter Cells (C15) Activity by TL1A Neutralizaiton Abs with TL1A Target Cell.
Figure 7. Dose Response of DR3 Agonist Ab in DR3 Effector Reporter Cells(C15).
